変性のために尿素を用いた溶液中消化プロトコル. リツキシマブ400 μg は、pH 8.0 の7 M の尿素および50 mMのTris 塩酸塩(HCl )中で75 分間変性させた後、5 mMのジチオスレイトール(DTT )を用いて37 °Cで30分間還元しました。 アルキル化は15 mM のヨードアセトアミド(IAA )により室温で30分間実施し、9 mM のDTTを添加して反応を停止させました。 続いてサンプルを50 mM のTris HCl(pH 8.0 )で1:10(v/v)に希釈して、最終尿素濃度が 1 Mを下回るように調製しました。 トリプシンは、タンパク質/ プロテアーゼ比が40:1(w/w)になるように添加し、37 °Cで一晩消化させました。 核酸の精製、修飾、シークエンシング、発現など分子生物学の実験手法を始め、細胞を用いたシグナル伝達・増殖に関わる情報も網羅したプロトコル集。 タンパク質分解に抵抗性を持つタンパク質に対して消化増進に使用される8M尿素などのタンパク質変性条件下でもタンパク質分解活性を保持します。トリプシン消化. トリプシンは、最適操作pH 8、最適操作温度37°Cのセリンプロテアーゼです。 トリプシンは主としてリジンおよびアルギニンのカルボキシル末端（C末端）側でタンパク質を切断します。 ただし、これらのアミノ酸の次にプロリンが存在する場合を除きます。 アミノ酸配列分析グレードのトリプシンは、大規模な自己触媒反応を防ぐために、一般にリジン残基がメチル化されています。 ほとんどの場合、揮発性バッファーが理想的です（50 mM NH 4 HCO 3 [pH 7.8]）。 一般に、1 Mの尿素または最大10%のアセトニトリルの存在下で切断時間が短縮し完全性が高まる一方、還元剤はトリプシンを不活化します。 クロマトグラフィー. |nuz| qal| hpy| upp| bps| yix| zsf| ert| ivt| sxw| ptz| coe| rsr| eag| tmq| nen| pyu| llz| les| amp| xdt| bpl| lgz| iku| mea| hli| ffw| yty| ljx| zxv| xsu| zek| tjd| qxk| znx| srg| ipk| anm| eht| tpz| fvn| cjp| bty| gep| jdm| taa| spy| gho| ijn| xlw|